据南京巴傲得生物科技有限公司2013年11月11日11:25最新数据分析：质粒构建表达方式带标签后可以增加蛋白质的可溶性,也为纯化带来了方便。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、质粒构建表达方式、最先进的蛋白表达、抗体定制供应商、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售，致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:025-68037686
基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。将目的基因与运载体结合的过程，实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体，首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。然后用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端，拥有相同效果）。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处，首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键，再加入适量DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，形成一个重组DNA分子。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合，形成重组DNA分子（也叫重组质粒）的。
构建表达载体首先取决于你的实验目的，例如你的实验是否要求你的蛋白表达出来必须可溶性蛋白，载体上面的标签决定了你的纯化方法，当然也决定了实验成本，等等一系列需求。拿带标签的载体为例，因为带标签后可以增加蛋白质的可溶性，也为纯化带来了方便，一般都会采用。标签一般都是在目的蛋白的N端，这样就需要考虑读码框的问题，一定要与前面的读码框保持一致。利用酶切连接的方法连入目的载体这个应该都知道，或者用gateway系统，非常方便，我就经常用gateway载体，构建起来速度呼呼的。
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