科软仿手工甩干式全自动洗板机是传统洗板机和传统甩干机的有机组合的一体机。相对传统洗板机而言,其最大特点是:1、不用人工拍板;2、不会堵针;3、故障低;4速度快。
不吸液:删除吸液针等吸液系统,利用旋转和重力去液。
无污染:水平放板,旋转向下甩液,保证最大程度去液。独特锅底状接液设计,极难反溅。独有的防污染预处理洗板程序。
免拍板:微孔内无残留,洗好后不用人工拍板。免除拍板给环境和使用者造成的不利影响。
不堵孔:无吸液针,极大地降低堵孔风险。注液针防堵孔处理,实现注液针不堵孔。闲时管路自动清洗,避免结晶堵塞。开关机自动维护,保证管路内畅通无阻。
不撞针:注液针不移动,与微孔板保持足够距离,有效保护酶标板和孔内包被。
可条洗:每块板可以任选条数进行清洗,节省洗液,保护环境。
速度快:一次可洗1—6块板,KR306洗好6块板约4分钟。
酶标记的抗原或抗体称为结合物(conjugate)。抗原由于化学结构不同,可用不同的方法与酶结合。如为蛋白质抗原,基本上可参考抗体酶标记的方法。制备抗体酶结合物的方法通常有以下几种。
1. 戊二醛交联法
戊二醛是一种双功能团试剂,可以使酶与蛋白质或其他抗原的氨基通过它而偶联。戊二醛交联可用一步法(如连接A P ) ,也可用二步法(如连接H R P ) 。举例如下:2 m g 〜5 m g 纯抗体与5 m g A P 混合于0. 1 m o l / L pH6. 8 的憐酸缓冲液1 m L 中,4 °C下对相同缓冲液透析平衡。磁力搅拌下,缓慢加人1 % 戊二醛0. 05 m L ,在室温下放置2 h。在4 °C下对0.05 m o l / L p H 8 . 0 Tris缓冲液透析平衡,即得酶标抗体。辣根过氧化酶可溶解于5 0 % 饱和度硫酸铵中。用上法交联后可用5 0 %饱和度硫酸铵沉淀酶标抗体,弃去上清中游离酶。戊二醛一步法操作简便、有效,而且重复性好。缺点是交联时分子间的比例不严格,大小也不一,影响效果。制备H R P 抗体结合物也可用二步法,即先将H R P 与戊二醛作用,透析除去戊二醛,在PH9. 5 缓冲液中再与抗体作用而形成酶标抗体。此法的效率可高于一步法1 0倍左右。
2. 过碘酸盐氧化法
本法只用于H R P 的交联。该酶含1 8 % 碳水化合物,过碘酸盐将其分子表面的多糖氧化为醛基。用硼氢化钠(N a B H 4)中和多余的过碘酸。酶上的醛根很活泼,可与蛋白质结合,形成按摩尔比例结合的酶标结合物。有人认为此法为辣根过氧化酶交联最有效的方法。但也有人认为由于所用试剂较为剧烈,各批实验结果不易重复。
按以上方法制备的结合物一般混有未结合的酶和抗体。理论上结合物中混有游离酶不影响E L I S A 中最后的酶活性测定,因经过洗涤,非特异性吸附于固相上的游离酶已被洗去。但游离的抗体则会与酶标抗体竞争相应的固相抗原,因而减低结合到固相上的酶标抗体量。因此制备的结合物应予以纯化。纯化的方法较多,分离大分子混合物的方法均可应用。硫酸铵盐析法操作简便,但效果不如用SephadexG ~ 2 0 0凝胶过滤的好。